本生快訊：Elisa試劑盒實驗的技巧及注意事項

　　在操作elisa試劑盒實驗前，不少老師會找尋很多的相關(guān)實驗資料，網(wǎng)上的資料一大堆，然而真正所能夠需要用到的技巧和注意也就那幾條，熟練的了解并掌握之后再應(yīng)用到實驗中就會簡單的多。

　　一、加樣的經(jīng)驗總結(jié)

　　加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，個孔與一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間控制 在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。

　　二、孵育的三條必知

　　1.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);

　　2.洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);

　　3.同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。

　　三、ELISA洗滌小技巧

　　洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直 接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響*后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

　　四、反應(yīng)時間的控制

　　加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔 10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

　　五、操作說明

　　1.封板膜只做一次性使用。

　　2.標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高時先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測定，計算時請乘以稀釋倍數(shù)。

　　3.各步加樣均使用加樣器，并經(jīng)常校對其正確性，一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)(標(biāo)本數(shù)目多的時候，上海研域推薦使用排槍加樣)。

　　4.液體標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月;標(biāo)本溶血會影響檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。

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