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細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項(xiàng)!

更新時(shí)間:2021-09-24    點(diǎn)擊次數(shù):6625

  細(xì)胞培養(yǎng)的步驟及注意事項(xiàng)!

  一、 復(fù)蘇

  1. 把凍存管從液氮中取出來(lái),立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

  2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái)),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  3. 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中后左右輕輕搖動(dòng),使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

  4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

  5. 3天換一次培養(yǎng)基。

  二、 傳代

  1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

  2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

  3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。

  4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

  5. 用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。

  6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  7. 倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來(lái)。

  8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個(gè),正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。

  三、 凍存把細(xì)胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái),分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。4℃  30min,-20℃ 30min,-80℃過(guò)夜,然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制: 70%的培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.  DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

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